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现在只有WB金标能确诊了!!! [复制链接]

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回复: 现在只有WB金标能确诊了!!!

很久没有到这里来了,记得08年的时候,大家都在纠结于H试剂,我就是其中一个,当时我跑遍了南京,江门,上海,广州番禺,网络上看了medhelp的相关帖子,查阅了SCI上华盛顿大学Morrow教授关于H试剂的研究报告,还发过电子邮件联系VCR(华盛顿大学的病毒研究实验室,就是美国唯一做WB试验的实验室),还看了南京皮研所的一位做H试剂准确性的博士研究论文。
     客观的说,我于09年脱恐,事实证明我没有感染,只是常见的包皮龟头炎。对于PZ的恐惧我切身体会,之所以09年后不来坛子,是因为不想回首恐惧PZ的日子,但觉得还是应该把自己的了解的真实情况告诉各位。
       这是我在paozhen8上发的一篇《H试剂的那些事儿》的帖子,由于在paozhen8上和坛主争执,我的老账号iiuu被封,就注册了carline的账号,这是我对H试剂的一些认识。
                                        一、《H试剂的那些事儿》
      谢版主给的这个论坛让我发表我一下的言论,首先我申明,我不是郭的托儿,我不喜欢郭开始的时候H的信息作为收费项目(这里鄙视一下,不管郭搞不高兴),我想谈谈我和H的那些事儿。
1.H的准确性
     首先我谈谈我的经历,我做过H试剂的检验有2次,其中,H两次为阴(当然指2型的),先说说我对H的认识,首先H在美国应用非常广泛,用VRC实验室(美国华盛顿大学病毒学研究室及诊所)人员的话说,如果你6个月后的H检验为阴,那么你患2型GH的机会是very unlikily(基本为零)。如果有战友感兴趣我可以把我和VRC的邮件公布一下,不过全是英文的,我就不翻译了,怕有人说我误导。
2.IgM vs IgG
    首先肯定bio-caring和郭的基本观点,IgM没有意义,但是我不同意上述两位关于为什么IgM没有意义的理由,很简单,如果将IgM不能分型就认为IgM不能诊断HSVII,是不充分的,如果IgM仅仅是不能分型,那么我认为恰恰IgM对于诊断HSV2具有意义,理由是:我们知道单纯性疱疹病毒只有两种:1型和2型,其中1型在中国大部分人在很久以前就有了,那么说大部分人在成年以后不会出现1型的IgM,即便1型复发,如果成年人血液中出现IgM,绝大部分只有一种可能,那就是感染了HSV2,因此单纯性疱疹的特性决定的对IgM分型意义不大了,中国的成年人,只要血液中出现单泡的IgM,基本上就是HSV2,因此单纯因为IgM不能分型就认为IgM对诊断没有意义在逻辑上是不成立的。
    IgM没有诊断意义的真正原因是什么呢?medhelp上的HHH博士,VCR的医生,美国疱疹专家(那个什么steven.H我还不知道是何许人也,至少我在SCI上没有发现他的影子,郭医生不要拿板砖拍我!)在medhelp上有一篇帖子,论述为什么IgM没有意义,他的理由归结为:一是,从免疫学上来说,感染后首先出现IgM,然后当个体再次被免疫,在HSV即是复发后产生IgG,所以从原理上来说,应该是首先出现IgM,然后出现IgG,因此出现了bio-caring的那张图,但是,注意我说的是理论上,理论上这些现象在very young children上的现象是非常符合这种理论的,但是在adult(成年人)上,却不符合,大量的数据表明在成年人中有初发的人根本不出现IgM,直接产生IgG,至于为什么,HHH没有说;二IgM不能反映感染的时间,很多人(或者医生)认为,IgM只是在初发时出现,复发时不会出现IgM,这种观点同样只适合very young children,很多adult在复发时仍然出现IgM,所以检验出IgM不能表示你是初发;三关于IgM的准确性,HHH认为,很多人认为IgM不准确的原因是IgM不能分型,事实上并非如此,IgM不准确的原因更多的来源于试剂的物理化学反应的影响;四为什么很多医院喜欢做IgM,这一点bio-caring说对了,原因主要有:一是习惯性,大家做单疱1,单疱2习惯IgM和IgG一起做,那怕美国的Quest实验室也是有这种习惯,很多情况当医院要求做IgG时,Quest都会补充问要不要做IgM;二是,利益关系,IgM的试剂成本低于IgG,但在美国,实验室通过IgG和IgM向保险公司获得的美元是一样多的。
3 H的局限性,
   准确的说是所有重组gG糖蛋白试剂的局限性,这也许是大家最为关心的,如果大家感兴趣,可以上VRC实验室的网站可以下载资料(补充一下VRC是美国唯一做单泡1和单泡2 WB的实验室),里面叙述的关于H的局限性,归结来说就是,通过重组gG糖蛋白抗原的实际在抗体结合点上比真正病毒的结合点要少的多,也就是说elisa这种方法利用抗体与抗原反应的方法不能真正符合实际病毒与抗体的反应,这就是为什么H 的elisa不可能查出所有的抗体,这就是H目前的最大的局限性。但是VRC最后补充了一点:即便如此,事实表明H的敏感性和特异性仍然是非常高的。
4 H试剂人种的影响
   VRC没有做过H在中国人的适应性,但在越南、韩国、泰国,尼日利亚等国家做过H的人种适应性,结果表明敏感性和特异性除尼日利亚外基本都在90%以上,尼日利亚特异性较差,大约为70%。所以H对黄种人应该有比较好的适应性。研究结果表明H对华人敏感是大于86%,特异是大于96%,下面引述一下Morrow(再次声明我只听说过Morrow,没听说过Steven.H)教授关于尼日利亚专一性差的问题,Morrow认为,差异可能来自两个方面:一是H的敏感性,试验结果表明H相对WB的敏感性更好,但特异性WB更加出色,H能更早的发现2性抗体,尼日利亚的在选择实验对象上除了偏差,也就是说选择的实验对象更多的早期的感染者,WB没有检出,但H检出了,由于使用WB作为金标准,所以使得H的特异性降低(不明白的建议研究一下敏感性和特异性的概念),事实上也许这些人确实感染了2型病毒;二是病毒的变异,Morrow没有说在尼日利亚存在新的类型的病毒,但他说造成H试剂特异性下降的另一个原因就是可能在尼日利亚的病毒发生变异,由于WB的特异性更好,不能检出这些变异病毒引起的抗体,而H却检出了,造成H特异性的下降。我个人认为第二个理由十分重要,那么有没有可能在中国HSV也存在变异或新的亚型的病毒,H也无法检出造成H敏感性下降呢?这个还是很有启发意义的。
5 H可能出现的问题
   我认为如果H真的有问题的话可能出现在以下几个方面:
一是,H不准,这个什么原因我还不知道,就当是一种假设吧;
二是,H很准,但是H只是检测单泡2抗体很准,不是所有的患者都会产生特异性抗体,部分产生1型抗体的病患,在再次感染2型后不会产生2型特异性抗体;
三是,H很准,但是要知道H严格检测1或2型疱疹的抗体,但是事实上导致战友们有症状的疱疹病毒不一定只有1型或2型,可能存在一种疱疹病毒,不是1或2型,同样产生疱疹或类似于疱疹病毒感染的症状,但H由于高度的专一性不能检测到这些病毒的抗体,造成漏诊。
     以上是我的一点浅见,供大家参考!
下面是我与VRC试验室的邮件原文,我就不翻译了,防止别人说我误导,另外补充一句,电子邮件的地址是我在morrow发表的SCI论文的联系方式上找到的,会给我的应该是他们实验室的学生,用的学校的邮件。
Hi ####,(这是我的称谓,略去):

If there is a visible symptom present, the standard procedure is to
perform a viral culture or PCR. If there are no visible symptoms then, a
blood test will be the best approach. Blood tests are an important tool
in diagnosing herpes since 80-90% of people with herpes never have any
noticeable symptoms. One of the most commonly used herpes blood test in
the United States is the IgG herpes select ELISA (type specific) which
is about 98% accurate when taken 12 to 16 weeks after exposure. The
BioKit is about 97% accurate, also at 12 to 16 weeks after exposure. The
HSV Western Blot is considered the gold standard for testing (99%
accurate), but is not widely used since it is only available through the
University of Washington.

The blood tests for herpes are looking for the antibodies your body has
created in response to herpes. Creating antibodies takes some time which
is why the test is designed for 12 to 16 weeks after exposure. Once your
body has created antibodies, you will always have the antibodies. If a
person starts taking Acyclovir or Valacyclovir daily, this can delay the
creation of antibodies for a few weeks.

A half of a years is usually enough time for your body to create
antibodies. If you have contracted herpes, you will most likely test
positive on the herpes select ELISA blood test if it has been 6 months.
If your test is negative at 6 months, you most likely do not have herpes.

Hope that answers your questions!
Kaile Ross

### wrote:
> Dear Doctor.
>      Excuse me for my disturbing to you,thanks you for you e-mail sent
> to me, which was really helpful.
>      There are some forum about the GH, some member of the
> forum introdeced the antibody test,these member hold the point that the
> Herpeselect elisa kit was an                        
> accurate test,which can provided some valuable information for
> diagnose,but almost all Doctor in our country think the blood test is
> only suit to the investigate of epdimic, and useless in
> clinic diagnosis,they would more believed the symptom they have watched
> or the PCR test reslut.
>      I have read some other papers about the HSV IgG test, one author
> think the IgG test was useless, his result showed the OD of the IgG(not
> IgM) might rise at first episode, but the recurrent patinent's
> OD will descent and similar to the normal people, this paper was written
> by Doerr HW in 1987. The application of Herpeselect kit test
> in China might agreed with this point, too many recurrent patient
> Herpeselect test result was Negative, and almost all people with the
> atypical symptom got a negative result in our country, all of them take
> the test after 4 months. especially, one patient had taken the test 5
> times, All the results showed Negative, but the PCR test was
> Positive.Another question is some of these patients have
> taked some anti-herpe drug(Acyclovir,Valaciclovir),some Doctors think
> these drugs would delay the antibody's produce.
>        My questions were:
>       1. Does the antibody test suit to the clinic diagnose ?
>       2. How long does the IgG last in patient's blood ?  
>       3. if patients get the Acyclovir or the Valaciclovir, what effect
> on the Herpeselect elisa test reslut would be?
>       4. Does the antibody-test(herpeselect elisa,BiokitUSA, WB) used in
> US clinic diagnose ?
>       5. if one person got the Herpeselect elisa Negative result after
> half year, is it ture that he/she was not infected by herpe?
>  
>                Sincerely!
>  
>                                                                                
> ##

Hi,  The only way I can answer your question is that most people will develop IgG by 12 to 16 months.   So it is very unlikely that you have herpes and another test is not needed.  I do need to add, and that is if any symptoms develop get to your health care provided.
  Also it is not necessary to do a western blot the Herpes Select is very good at this time period.
                       Sincerely,
                     Mike Remington PA

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University of Washington
Virology Research and Remington Clinics
Phone: 206.720.4340
Fax: 206.720.4371
vrc@u.washington.edu
600 Broadway, Suite 400
Seattle, WA 98122
UW BOX 359928



On Sun, 7 Dec 2008, [GBK] ### wrote:

> hi, Ross
>    how about the Herpeselect Elisa test?
>    I had taken this test 3 months after sex, it was negative result, the OD of HSV2 was 0.063, Does it confirm I hadnt been infected by the HSV?


###,
    Sorry I put months instead of weeks.  The proper form is, by 12 to 16 months 97 to 99% will develop IgG for herpes simplex 2.
     Sorry about that,
             Mike Remington PA

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On Fri, 12 Dec 2008, [GBK] ### wrote:

> Thank for your help! but I was infored from some website that about 98% people will develop IgG that enought to test in 12 to 16 weeks. why dose Doctor think it is 12 to 16 months?
>                Sincerely,
>                 ###
>

Hi ###,

The Western Blot test kit for HSV can only be ordered through the University of Washington Virology Laboratory. This is the website http://depts.washington.edu/rspvirus/.  On the left side of the webpage there is a request form which you can use to order the Western Blot test kit. Requesting the Western Blot test kit, drawing the blood, and returning the kit should be done through a doctor's office. Speak with your doctor about ordering the test through the website, or have your doctor contact the Virology Laboratory directly at 206.987.2088.

Good Luck,

Kaile Ross

Virology Research Clinic Study Coordinator



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On Sun, 30 Nov 2008, [GBK] ### wrote:

> Dear Doctor ,
>
>    if I want take a westernblot test for HSV and I am Chinese,
> how can I do?
>
>                                              ###>
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回复:现在只有WB金标能确诊了!!!

还有关于我和国内相关科研单位检查的情况,在bio-caring的帮助下,我分别在南京皮研所做过H试剂,他们的门诊是不做的,恰好他们有一个科研项目,于是把我当样本做了,在与他们的科研人员交流的过程中,了解到,他们认为这个是很准的。在09年4月的时候,我又在bio-caring 的帮助下去了上海医科大学,在他们的公共卫生管理学院(具体名字不记得了,大概是这个),做了H试剂检查,去的他们的实验楼,接受我的一个女老师,了解到H试剂在学术界是广泛被接受的,大家都用。至于为什么临床的医生不承认血检,以后慢慢说。
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回复:现在只有WB金标能确诊了!!!

幸福已远去,你的短消息收件箱已经满了!!!我的短消息发不出去!!
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回复:现在只有WB金标能确诊了!!!

继续昨天的话题\\\\\\\\\\\\\\\
      为何医院检验的医生认为使用恰当的试剂可以保证检验结果正确,而门诊医生基本不认同HSV的血检呢?原因是,门诊医生认为,病情的诊断要依靠临床症状,没有症状怎么说有病呢?举一个简单的例子,如HIV感染,HIV携带者和艾滋病人是两个概念,仅仅是检查HIV抗体呈阳性但没有症状,只能被称之为携带者,不能称为艾滋病人。因此病友们在门诊医生那里,常常会听到:没有水泡怎么能说是生殖器疱疹?换句话说,门诊医生认为生殖器上长水泡或溃疡均可认为是生殖器疱疹,这是一种形而上学的理论。
    还有一个是因为试剂的认证问题,在09年以前,国内的疱疹血检试剂没有认证的,只是H试剂在部分科研项目上被应用,同时由于PZ对于人的正常生活除了造成一定的痛苦外,基本上没有什么负面的影响,所以这种病根本就是不是什么问题,就有点类似有点关节炎,一下雨就有点疼一样,其实疱疹最大的危害就是对人心理的创伤,医生不会把它当回事,造成对PZ的认识很多的不到位。09年后Trinity试剂获得卫生部的认证,T试剂开始在很多医院应用,这个时候关于生殖器疱疹到底是怎么回事的问题出现了,因为是卫生部认证的试剂,那么很多有症状的病患却血检出阴性,我们就要区分生殖器上出现溃疡,水泡和HSV感染,特别是出现溃疡,对于男性来说,更多的是包皮过长由于念珠菌感染造成的包皮龟头炎,一般情况下,男性应当将过长的包皮翻起来,露出全部龟头,并保证每天用清水冲洗一次,最好两次。
    那么做个假设,如果H试剂或者T试剂不准,原因回是什么呢?这就要研究H试剂和T试剂的可靠性的考核体系,目前大多数对Hsv准确性考核都是以WB(Western blot)为金标准的,什么是金标准?就是假设WB检测的结果是100%准确,考察H或T相对的准确性,假设WB检测了150个样本,结果表明其中100人为阳性,50人为阴性,同时用H试剂检测,发现H试剂检测出105个阳性,其中WB检测为阳的100人中,H有90显示为阳,15人WB显示为阴,H显示为阳,10人WB显示为阳,H显示为阴,35人WB和H均显示为阴,那么H试剂的敏感性为90/100=90%,专一性为:35/50=70%,那么反过来假设以H试剂为金标准,WB的准确性如何呢?H显示为阳的105个样本中,WB显示为阳的为90,故敏感性为90/105=85.71%,H显示为阴的45个样本中,WB显示为阴的为35,故专一性为35/45=77.78%。通过以上考核标准可以看出,H试剂的准确性是建立在金标准的准确性之上的,若金标准出现问题,哪试剂的准确性就无从谈起。那么WB准不准呢?我所知道的HIV的检测和HSV一样用elisa方法(就是H试剂的方法),若出现阳性,则再用WB确诊,可以看出WB在HIV的检验中还是比较可靠的,HSV就不太清楚了,至少WB在HSV的应用上还没有像HIV出商品化得试剂盒,这也是H试剂、T试剂存在准确性的问题之一。那么据我了解,国内也有使用PCR方法为金标准检验H试剂的敏感性和专一性的,结果显示比较好,但没有达到90%以上,但是PCR方法只有在出现典型症状时取泡液检测最可靠,对非典型症状检测结果不可靠。而H试剂和T试剂的检测是建立在感染后产生特异性抗体的基础之上的,那么是不是所有感染者在感染后一定出项特异性的抗体呢?由于中国人中70%以上成年人都感染有HSV-1病毒,体内有I型抗体,产生的I型抗体是否会影响II型抗体的产生呢?由于没有进行研究,所以不能确定,但是主流的观点是,只要感染的II病毒,体内一定会有对应的抗体产生。
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回复:现在只有WB金标能确诊了!!!

回复有点研究:大于86%的结果确实相对而言容易出现假阴性,当时南京皮研所的一位博士去成都出租汽车司机做过一次研究,大概取了几百个样本,研究结果表明以WB为金标准,H的敏感性大约90%左右,后来有一次有机会和该博士通过话,他认为H相对WB敏感性大约为90%,同时他指出,H也只作为参考,不能确诊,理由是一个门诊一天接纳的病人有10个的话,一年将有2500人,若漏诊或误诊,将会有250人被误判,因此,只能作为参考。同时有一点还是要指出的,确定是否为阳,还要看OD值,事实上H试剂的OD值标准是由厂家说明书确定,而OD参考值,是根据白种人来定的,该博士在论文中建议要降低OD参考值,这样的话会降低专一性,但敏感性会大大提高。鉴于此,做H建议在初发6个月后,然后再3个月后在做一次。同时需要特别指出的是,H的所有的敏感性,专一性都是建立在两个假设的基础上的:一是WB是十分准确的;二是感染HSVII后,一定会产生特异性抗体。
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回复有点研究:我保持一年时间每2个月血检一次,记录OD值,但一年来没有明显上升,保持在非常低的水平,同时在有疑似症状的时候取分泌物做PCR和念珠菌,每天认真清洗下身1次。一年半下来血检和PCR全阴,检测到有念珠菌感染。积极清洗后再未发现症状。同时我一直在强调,T试剂也好,H试剂也好他的准确性是建立在WB准确的基础之上的,也就是说如果有H检测,完全没有必要用WB,如果H不准,那么WB也不准,还需要强调的是H试剂的敏感性要高于WB,如果是用于排除的话,H的检测结果更可信,在国外一般是当H检测为阳的时候,在进行WB检测确认的,初筛都用H。
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回复: 现在只有WB金标能确诊了!!!

H试剂敏感性高于WB是在华盛顿大学VRC实验室Morrow教授发表的一篇SCI中提到的,前面我已经提到了,对几个国家一万多个样本进行检测的结果,表明H能更早的检测到HSVII抗体,如果是以WB为金标准,那么H试剂的专一性,也就是特异性会下降,因为WB需要距感染更长时间才能检测到,而H已经检测到了,以WB为金标准会导致H的特异性下降, 而事实上个体确已感染PZ。
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有点研究,建议还是好好看看我的回帖啊,我不是一直在强调H试剂的所谓敏感性和特异性都是以WB为金标准的。所谓金标准就是假设某种方法的结果为标准。你可以以WB为金标准,甚至可以对样本进行回访调查,看症状的诊断为金标准。
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关于OD值,是H检验后用于划分阴性阳性的检测值,国内很多医生认为看OD值没有意义,但在medhelp上,国外的医生给的意见是用同一种可靠的方法(H或T)检测后,观察OD值,若无显著变化,说明没有特异性抗体产生。
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