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生殖器疱疹的实验室诊断

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    生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒感染泌尿生殖器及肛门部位皮肤粘膜而引起的一种复发性疾病，是一种较常见性传播疾病。生殖器疱疹可呈慢性复发过程，尚无彻底治愈的方法。生殖器疱疹的发生和复发可给患者带来很大的身心痛苦，影响其生活质量和人际交往，并可能引起播散性感染、病毒性脑膜炎、脊髓脊神经根病、盆腔炎综合征等一系列并发症。孕妇生殖器疱疹还影响优生优育，可引起子宫内HSV感染和新生儿HSV感染，导致流产、早产、死产、新生儿死亡或发生严重后遗症。

    生殖器疱疹的临床表现多样，可表现为典型的集簇性水疱、脓疱、溃疡及结痂，也可表现为非特异性红斑、丘疹、裂隙、硬结(或疖肿)、毛囊炎、皮肤擦破、红肿渗液性包皮龟头炎等不典型或不易识别的皮损，但无症状亚临床感染者较为普遍。
由于生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，在不同的个体中甚至同一个体的不同发作中，临床表现都可不相同，因而该病常常需要通过实验室检测手段来证实。单纯疱疹病毒有两种类型：单纯疱疹病毒1型和单纯疱疹病毒2型。多数生殖器疱疹是由2型病毒引起，但近年来1型病毒所致生殖器疱疹增多，约占该病的10%～40%。两型病毒感染的预后有差别，因此有必要在作病毒检测的同时进行病毒分型。生殖器疱疹的常用实验室诊断技术包括以下几个方面：

    (一)病毒分离培养和分型
    这是生殖器疱疹实验室诊断的"金标准"。通常需时2～4天，可长达14天。分离培养成功与否影响因素较多：①采集的标本中含有活病毒(感染性病毒颗粒)；②正确的标本取材、运输、保存和接种；③避免细菌和真菌污染。临床标本可以来自皮损、尿道内、宫颈管。临床标本的来源部位和疾病的病程影响病毒分离培养的敏感性，采用斑丘疹、水疱、脓疱、溃疡、结痂性皮损标本作病毒分离培养的敏感性分别为25%、94%、87%、70%和27%。
    病毒培养的初步结果可通过免疫学方法(如免疫荧光法、免疫酶法、酶联免疫吸附试验等)和分子生物学方法(如DNA限制性内切酶图谱、DNA探针分子杂交技术)来进行鉴定和病毒分型。通常使用单克隆抗体免疫荧光试验或酶免疫试验进行分型，此法精确且简单。现在许多单克隆抗体及分型试验的试剂都已商品化。

    (二)快速诊断试验
    1、细胞学检查：在皮损基底部取标本，用巴氏(Papanicolaou)或瑞特-吉姆萨(Wright-Giemsa，即Tzanck)染色法染色后，于光镜下观察，于感染细胞中出现胞浆空泡，细胞融合成多核巨细胞，有时见细胞核内包涵体。这种检查的敏感性只有抗原检测法、DNA检测法或病毒分离培养法的敏感性的50%～70%，而且不具特异性。
    2、抗原检测：用免疫学技术检测病毒抗原是目前最常用的快速诊断方法。这些方法均以特异性抗病毒抗体(单克隆抗体或多克隆抗体，常用单克隆抗体)为基础，包括直接免疫荧光试验、免疫酶染色和酶联免疫吸附试验(ELISA)。这些方法的敏感性可达病毒分离培养法的70%～90％。但其前提是要选择质量高、特异性好的试剂。目前，我国医疗市场上应用的病毒抗体的质量和特异性欠佳。
    3、电子显微镜检查：可显示水疱或其它皮损中的病毒颗粒，但敏感性低，不到病毒分离培养法的10%，而且不能与其它疱疹病毒相区别。

    (三)HSV-DNA或基因检测法
    1、核酸杂交技术：应用DNA杂交技术检测病毒DNA，其敏感性和特异性相当于免疫荧光法。使用商品化的生物素标记探针，通过原位杂交技术可检测临床标本中的病毒DNA，但操作较为复杂，实验要求较高。
    2、聚合酶链反应(PCR)：使病毒DNA片断通过PCR体外扩增以增加检出的敏感性，是成人及新生儿疱疹性脑膜炎的首选实验室诊断方法。此法较病毒分离培养法及脑脊液病毒抗体检测更为敏感，且可同时对病毒进行分型。近年来出现的PCR-ELISA或PCR-微孔板杂交法，将PCR技术、核酸杂交技术和酶联免疫技术结合起来，具有很多优点。但PCR和PCR-ELISA技术在生殖器疱疹诊断中的应用价值尚在评价之中。

    (四)血清学诊断
    1、血清学诊断的方法：检测HSV抗体的方法包括补体结合试验、中和试验、被动血凝试验、间接免疫荧光试验、免疫酶试验、放射免疫试验、ELISA、免疫印迹试验(WBA)。其中许多方法以感染1型和2型毒株的细胞培养物为抗原，难于区分病毒抗体的类型。这些方法中，以中和试验和间接免疫荧光试验使用较多，主要用于回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大。当用于回顾性诊断原发性病毒感染时，应在急性期和恢复期取双份血清，恢复期血清抗体滴度是急性期抗体滴度的4倍或4倍以上时有意义。病毒感染的型特异性血清学诊断方法(主要是WBA和一部分ELISA试验)，采用病毒的型特异性的糖蛋白G(gG-1和gG-2)为抗原，可敏感特异性检测并区分血清中的抗1型病毒和抗2型病毒抗体。目前尚无商品化的HSV血清抗体的蛋白印迹检测试剂盒面世，这种方法仅限于某些专业实验室中进行。
    2．血清学诊断的意义 由于血清学诊断不能区分口唇感染和生殖器感染，而且目前市场上的单纯疱疹病毒血清抗体检测试剂盒并不能准确区分1型和2型病毒感染，致使许多临床医生并未意识到其重要性。事实上，大部分生殖器疱疹疱疹病毒感染无症状或症状不典型，而不论是否出现皮损，感染者均存在着潜在的传染性。亚临床无症状感染在该病性传播中起着重要作用，未及时发现这类感染者并采取相应预防措施是造成生殖器疱疹流行的重要因素。对于有症状者，应选择病毒分离培养或抗原及DNA检测方法来诊断；而对于无皮损者，血清学试验是判断是否感染的最好方法。型特异性血清抗体检测是发现亚临床无症状感染者的最可行手段，因而型特异性血清学诊断对于防止生殖器疱疹的性传播和母婴传播有着重要意义。型特异性血清学诊断方法在生殖器疱疹的临床研究、流行病学研究和监测中将发挥重要作用。

(赖伟红)

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